二胡一般采用泛音進行調弦，具體方法是：左手小指按住弦長（指千金與琴馬之間的線段）的1/2處，運弓拉響外空弦音后，然后將小指輕浮，這時會得出一種純凈透明、類似竹笛聲的外空弦高八度音，它與渾厚圓潤的外空弦音形成一種強烈的色彩對比，當弓子在外弦上拉滿一弓后，現在弓毛又轉為擦內弦，這時小指離弦，用食指輕浮于全弦的1/3處，隨著弓子的漸漸推進，此時會發出一種細膩清越，比內空弦高十三度的琴聲，其音量略小于外弦1/2處的八度泛音。如果內外弦的五度音是調準了的，這兩處的泛音音高應完全相等；如果它們之間的音高還存在著偏差，這說明五度音的準確度還不夠。如果不求絕對音高，只要求相對音高的話，我們可以以任意一根弦的泛音音高為“參照音”，然后把另一根弦指定位置的泛音音高調到相等高度為止。
    初次練習泛音，內弦1/3處泛音效果很可能不如外弦1/2處理想，這也許是內弦推弓的力度不如拉弓容易控制，可改變方式試試。初次練泛音，會發出煩燥刺耳的“殺雞殺鴨”聲，這可能是三方面原因造成的：一是弓毛擦弦用力不勻，二是觸弦位置（即泛音點）不對，三是指頭觸弦是采用的實按。努力從這三個方面去改進，就有可能發出透明清越的泛音來?！?
    除了用泛音來校對二胡的定音外，也可用其它固定音高樂器來幫助二胡定音。像鋼琴、口琴、笛子及音笛、音叉等都可以用來定音，但選用這些樂器來定音一定要從二胡這件樂器的發音性能來考慮，過高過低都會影響演奏效果。過高則由于琴弦的張力大，使琴皮承受的壓強超過了規定限度，振動極不協調，就會導致發音干枯單調，還會大大縮短琴弦琴皮的使用壽命；定得過低由由于琴弦過于松弛，琴皮共振效果差，造成發音晦澀暗淡、同時因琴弦失去必要的張力，使指頭觸弦時缺乏相應的反作用力，音準也不易控制。

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